Caracterização Fenotípica e Molecular de Neisseria gonorrhoeae Isoladas no Rio de Janeiro, 2002 – 2003

Phenotypic and Molecular Characterization of Neisseria gonorrhoeae Isolated in Rio de Janeiro, Brazil, 2002 – 2003

 

Nero A Barreto1,  Raquel R.P. Sant’anna2,  Luisa BG Silva3,  Aline A Uehara4, Renata C Guimarães5 ; Marise D Asensi6

 

Caracterização fenotíca e molecular de Neisseria gonorrhoeae

 

1Prof. Adjunto do Departamento de Microbiologia e Parasitologia da Universidade Federal Fluminense. Setor de DST da UFF.

2Biomédica. Aluna do Curso de Especialização em DST/UFF.

3Bióloga. Setor de DST/UFF.

4Bióloga. Setor de DST/UFF.

5Monitora de Bacteriologia. Setor de DST/UFF.

6Pesquisadora Doutora do Departamento de Bacteriologia da FIOCRUZ.

Fonte financiadora e apoio: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico – CNPq. Proc.466908/00-8; UNESCO/ PNDSTAIDS do Ministério da Saúde. Projeto 914/BRA/58-UNESCO;  Trabalho de tese do Curso de Doutorado em Biologia Parasitária do Instituto Oswaldo Cruz, desenvolvido no Departamento de Bacteriologia da Fundação Oswaldo Cruz.

 

 

RESUMO

 

Introdução: ao longo da era antimicrobiana Neisseria gonorrhoeae vem desenvolvendo resistência a vários agentes. Estima-se que ocorra mais de 1,5 milhão de novos casos por ano no Brasil e a vigilância da emergência e disseminação de cepas resistentes deve ser periodicamente monitorada.Objetivos: avaliação da resistência, caracterização fenotípica e molecular de gonococos isolados na região metropolitana do Rio de Janeiro no período de fevereiro de 2002 a junho de 2003, estabelecendo informações básicas para estudos posteriores. Conhecer o perfil sócio-demográfico dos pacientes portadores de gonorréia. Métodos: Neisseria gonorrhoeae isoladas de forma consecutiva foram testadas para penicilina, tetraciclina, azitromicina, ciprofloxacin, ceftriaxona e cloranfenicol, utilizando o método E-test para determinação da concentração mínima inibitória (CIM). Para todas as amostras foram realizadas a pesquisa de b-lactamase, análise plasmidial, sorotipagem e eletroforese em campo pulsado (PFGE) para estudo da variabilidade genética. As características sócio-demográficas dos pacientes foram obtidas nos prontuários médicos. Resultados: das 115 amostras testadas, 10(8,7%) eram produtoras de β-lactamase (PPNG), 88 (76,5%) exibiam resistência intermediária a penicilina e 17 (14,8%) eram sensíveis. Para tetraciclina, 39 (33,9%) foram resistentes, 37 (32,2%) manifestavam resistência intermediária e 39 (33,9%) sensíveis. Resistência mediada por plasmídio a tetraciclina (TRNG, CIM≥16 µg/mL) foi detectado em 20% dos isolados. Frente ao cloranfenicol, 4 (3,4%) foram resistentes, 14 (12,2%) com resistência intermediária e 97 (84,5%) sensíveis. Foi encontrado 23 (20%) isolados com sensibilidade diminuída a azitromicina (CIM 0.25 – 0.5 µg/mL) e duas (1,7%) com sensibilidade diminuída a ciprofloxacin (CIM=0.5µg/mL). Todas as amostras foram sensíveis a ceftriaxona. Entre as PPNG, encontramos três tipos distintos de plasmídios, o tipo Ásia (4,4 Mda), África (3,2 Mda) e o Toronto (3,05 Mda). O sorogrupo predominante foi o I-B/WII/III em cerca de 90% das amostras. Conclusão: a vigilância da resistência aos antimicrobianos é importante para monitorar a emergência e dispersão de cepas resistentes, auxiliando na escolha terapêutica. Na região Rio de Janeiro, penicilina e tetraciclina não devem ser recomendadas para o tratamento de gonorréia e o uso de azitromicina exige atenção. A análise fenotípica e genotípica das amostras estudadas fornecerá instrumentos comparativos para futuros estudos epidemiológicos. Nossos pacientes portadores de gonorréia são homens brancos, jovens (mediana 22 anos), solteiros, heterossexuais, com múltiplos parceiros, com nível de escolaridade e renda familiar baixos, e expostos continuamente a riscos de adquirir uma doença de rota sexual.

 

Palavras-chave: Neisseria gonorrhoeae, resistência, plasmídios, sorotipos, b-lactamase.l

                          

 

ABSTRACT

 

Introduction: along of antimicrobial era Neisseria gonorrhoeae have been developing resistance to several agents. It is estimated the occurrence of more than 1,5 million new cases for year in Brazil and the emergence of the vigilance and dissemination of resistant strains must be periodically monitorated. Objectives: evaluate the resistance, phenotypic and molecular characterization of gonococcus isolated in the metropolitan area of Rio de Janeiro between February 2002 and June 2003, establishing basic information for further studies. Demographic profile of the patients with gonorrhea was determined. Methods: samples of Neisseria gonorrhoeae isolated consecutively were tested for penicillin, tetracycline, azithromycin, ciprofloxacin, ceftriaxone and cloranfenicol using the E-test method to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). All the strains were tested for b-lactamase, plasmidial analysis, serotyping and Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) to study the genetic variability. The demographic characteristics of the patients were obtained in medical file. Results: of the 115 tested samples, 10 (8,7%) were b-lactamase producing (PPNG), 88 (76,5%) had intermediary resistance to penicillin and 17 (14,8%) were sensitive. For tetracycline 39 (33,9%) were resistant, 37 (32,2%) had intermediary resistance and 39 (33,9%) were sensitive. The resistance mediated by plasmid to tetracycline (TRNG, MIC ³ 16 mg/mL) was detected in 20% of the isolate. To cloranfenicol, 4 (3,4%) were resistant, 14 (12,2%) had intermediary resistance and 97 (84,5%) were sensitive. Were found 23 (20%) isolates with reduced susceptibility to azithromycin (MIC 0.25 – 0.5 mg/mL) and 2 (1,7%) with reduced susceptibility to ciprofloxacin (MIC = 0.5 mg/mL). All the samples were sensitive to ceftriaxone. Among PPNG, we found three distinct type of plasmids, the Asia (4,4 Mda), Africa (3,2 Mda) and Toronto (3,05 Mda) types. The predominant serogroup was I-B/W II/III in about 90 % of the samples. Conclusion: the resistance surveillance to antimicrobial is important to monitorate the emergence and spread of resistant strains helping in therapeutic choice. In the area of Rio de Janeiro, penicillin and tetracycline are not recommended for the treatment of gonorrhea and the use of azithromycin demands attention. The phenotypic and genotypic analyses of the studied samples will give comparative instruments for future epidemiological studies. Our patients with gonorrhea are white men, young (average 22 years old), singles, heterosexuals, with multiple partners, with low level of education and familiar income, and continually exposed to risks of acquiring sexually transmitted diseases. 

 

Keywords: Neisseria gonorrhoeae, resistance, plasmids, serotypes, b-lactamase.